新城疫病毒HN09-69株P基因的克隆、序列分析及表达

• 作者: 岳旭龙 崔保安 张宇耕 李双亮 李新生 王忠田 王泽仁 陈礼朋 高文明
• 来源期刊: 西北农林科技大学学报：自然科学版
• 学科: 农学
• 关键词: 新城疫病毒 P基因 原核表达 SDS-PAGE Western blotting
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 动物医学
• 页码范围: 20-26
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.5
• 语种: 中文

摘要

【目的】对新城疫病毒（NDV）HN09-69株P基因进行克隆、序列分析和表达鉴定,为研究P和V蛋白的功能,及NDV新流行毒株的免疫预防提供理论依据。【方法】以HN09-69株NDV为研究对象,根据GenBank上发布的相关P基因参考序列设计引物,进行RT-PCR扩增、克隆和序列测定分析,将P基因的核苷酸序列与相关参考株的P基因序列进行比对分析并构建进化树。将P基因克隆到原核表达载体PET28a（＋）中,得到重组质粒rPET28a（＋）-P,将重组表达质粒转化到BL21（DE3）中诱导表达,用SDS-PAGE电泳和Western blotting检测表达情况。【结果】扩增出了HN09-69株P基因的ORF,序列长度为1 188bp。NDV HN09-69株核苷酸与弱毒株La Sota、clone-30同源性分别为82.5%和82.4%,与强毒株F48E8同源性为84.9%,与鸭源,鹅源NDV核苷酸同源性分别为97.9%～98.4%和96.0%～98.0%。SDS-PAGE电泳和Western blotting检测结果表明,重组P蛋白分子质量约为54ku,符合预期结果,在大肠杆菌中主要以可溶性的形式表达。【结论】NDV HN09-69株与SDWF-02和SD-09鸭源强毒分离株同源性高,亲缘关系近。重组P蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达。