泛素连接酶LNX1的表达、活性测定和功能初探

• 作者: 郭正光 高友鹤
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 泛素连接酶 表达 酶活性测定 LNX1 Kv1.4
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 523-526
• 分类号: Q78|Q55
• 字数: 2892字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2012.04.013

摘要

目的:在大肠杆菌中表达重组人泛素连接酶LNX1,并研究其对钾离子通道蛋白Kv 1.4的泛素化作用.方法:构建人LNX1重组蛋白原核表达载体pGEX-LNX1,在大肠杆菌中通过IPTG诱导表达重组蛋白,表达产物经GSTrap FF纯化,并通过体外泛素化(in vitro ubiquitination)方法测定其泛素连接酶活性,同样用体外泛素化方法研究其对含有Kv1.4的C端的人工底物的泛素化.结果:获得了纯化的有泛素连接酶活性的重组人LNX1蛋白,重组LNX1可以在体外泛素化体系中泛素化含有Kv1.4的C端的人工底物.结论:重组人LNX1原核表达成功,具有泛素连接酶活性,并催化Kv1.4的泛素化.