一个新的剪接位点突变g.13776_13777insAGGT导致Ⅰ型遗传性抗凝血酶缺陷症

• 作者: 丁秋兰 夏燕 奚晓东 张利伟 戴菁 王学锋 王鸿利 许冠群 陆晔玲
• 来源期刊: 诊断学理论与实践
• 学科: 医学
• 关键词: 抗凝血酶 基因突变 异位转录 分子机制
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 252-257
• 分类号: R446
• 字数: 4865字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-2870.2012.03.012

摘要

目的:对1例Ⅰ型抗凝血酶(AT)缺陷症患者及其家系进行表型诊断、基因分析及分子发病机制研究.方法:常规筛查检测AT缺陷症患者及其家系人员的凝血功能,采用血栓弹力图评估其高凝状态,用ELISA法检测抗心磷脂抗体(ACA)、抗β2GPI抗体,稀释的蝰蛇毒法检测狼疮抗凝物质(LA),发色底物法检测抗凝血酶(AT∶A)和蛋白C活性(PC∶A),凝固法检测蛋白5活性(PS∶A),荧光偏振免疫法测定同型半胱氨酸(Hcy),免疫比浊法定量检测抗凝血酶抗原(AT∶Ag),蛋白印迹分析血浆中AT的含量及相对分子质量,PCR法扩增AT基因的全部外显子及侧翼序列,DNA直接测序法进行基因分析.针对新的非经典剪接位点突变,提取患者的RNA,通过反转录反应结合巢式PCR扩增法,检测患者外周血中的AT异位转录本.结果:先证者的凝血筛查指标均正常,血栓弹力图指标显示其存在高凝状态,ACA、抗β2GPI抗体、LA、PC∶A、PS∶A及Hcy检测均正常；而其AT∶A和AT∶Ag同等下降,分别为45％和145 mg/L.血浆蛋白印迹检测结果显示,先证者血浆AT含量较正常混合血浆减少,但相对分子质量正常；基因分析发现,在5号内含子3’端剪接位点发生了杂合突变(g.13776_ 13777insAGGT)；巢式PCR产物直接测序检测到异位转录本,TA克隆分析发现,异常转录本与正常转录本的比例为1∶5.结论:剪接位点突变g.13776_13777insAGGT可导致AT基因异常转录,影响AT蛋白正常表达,导致该家系发生Ⅰ型遗传性AT缺陷症,此剪接位点突变为国际首次报道.