抗HIF-1α和survivin基因双靶位miR-RNAi载体的构建及其对胰腺癌细胞的作用

• 作者: 徐孙兵 朱一平 朱玲华 牟一平
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 胰腺肿瘤/遗传学 微管相关蛋白质类/遗传学 缺氧诱导因子1/遗传学 基因表达 遗传载体 质粒/遗传学 转染 肿瘤细胞,培养的 RNA干扰 微RNAs
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 81-88
• 分类号: R34
• 字数: 5482字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2012.01.014

摘要

目的:构建抗HIF-1α单靶位(anti-H)、抗Survivin单靶位(anti-S)以及抗HIF-1α和Survivin基因双靶位微小RNA表达载体(anti-H+S),观察和比较这3种载体对胰腺癌Panc-1细胞增殖的影响.方法:设计4组靶向HIF-1α和Survivin基因的寡核苷酸序列,连接至pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR质粒,构建两组共8个载体,依次为anti-H(Ⅰ)、anti-H(Ⅱ)、anti-H(Ⅲ)、anti-H(Ⅳ)和anti-S(Ⅰ)、anti-S(Ⅱ)、anti-S(Ⅲ)、anti-S(Ⅳ).实时定量RT-PCR检测靶基因mRNA的表达水平,将两组中mRNA下调作用最强的质粒串联,构建anti-H+S.用anti-H+S及mRNA下调作用最强的anti-H和anti-S转染胰腺癌Panc-1细胞,Western blot测定靶蛋白表达情况,MTT法检测细胞增殖活性.结果:经测序鉴定,所有anti-H、anti-S及双靶位质粒anti-H+S装载位点核苷酸序列与设计序列完全相符.anti-H的靶基因mRNA沉默效率依次为48％、2％、44％和30％；anti-S的靶基因mRNA沉默效率依次为72％、75％、58％和59％.由anti-H(Ⅰ)和anti-S(Ⅱ)串联得到双靶位质粒anti-H+S.anti-H+S的靶基因mRNA沉默效率为53％ (HIF-1α)和42％(survivin).anti-H(Ⅰ)、anti-S(Ⅱ)及anti-H+S与对照质粒相比均使靶基因蛋白的表达明显下降,细胞增殖受到明显抑制(P＜0.05).其中anti-H+S对细胞的增殖抑制作用强于anti-H(Ⅰ)和anti-S(Ⅱ),72h后差异有统计学意义(P＜0.05).结论:本研究成功构建了抗HIF-1α和Survivin的单靶位质粒和双靶位质粒；其中,anti-H+S抑制胰腺癌Panc-1细胞增殖作用强于anti-H(Ⅰ)和anti-S(Ⅱ).

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	牟一平	浙江大学医学院附属邵逸夫医院普外科	133	1376	20.0	30.0
2	朱玲华	浙江大学医学院附属邵逸夫医院普外科	26	145	7.0	11.0
3	朱一平	浙江大学医学院附属邵逸夫医院普外科	26	174	8.0	12.0
4	徐孙兵	浙江大学医学院附属邵逸夫医院普外科	2	4	1.0	2.0