鼠疫耶尔森菌Ⅲ型分泌系统相关蛋白β-内酰胺酶报告系统的建立

• 作者: 伏小平 杜宗敏 杨慧盈 杨瑞馥 谭亚芳 郭兆彪 韩伟
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 鼠疫耶尔森菌 T3SS β-内酰胺酶报告基因 质粒 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 658-661,672
• 分类号: R378.6
• 字数: 4082字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2012.09.004

摘要

目的 构建鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)Ⅲ型分泌系统(T3SS)相关蛋白β-内酰胺酶(TEM-1 β-lactamases,Bla)报告基因载体,旨在运用本系统检测鼠疫菌待测蛋白能否转运至宿主细胞内.方法 将TEM基因克隆入pA-CYC184载体中,构建用于鼠疫茵研究的TEM报告基因载体.把待分析的鼠疫菌基因及启动子区克隆入TEM基因上游,使鼠疫菌蛋白与TEM蛋白融合表达.将鼠疫菌基因-TEM融合表达载体电转化到鼠疫菌中,并感染HeLa细胞2h后,加入CCF2-AM底物,在激光共聚焦显微镜下观察结果.结果与结论 应用本系统检测了YopK-Bla、YscK-Bla、YscL-Bla和YscX-Bla进入宿主细胞的情况,YopK-Bla和YscX-Bla菌株感染的HeLa细胞呈蓝色,YscK-Bla和YscL-Bla菌株感染的HeLa细胞呈绿色,表明YopK及YscX可以进入宿主细胞,而YscK和YscL则不能.本研究成功地构建了适于鼠疫菌的TEM报告基因系统,该系统可作为分析其他鼠疫菌蛋白能否在感染的过程中进入宿主细胞的工具,为鼠疫菌T3SS相关蛋白致病机制研究奠定了基础.