农杆菌VirD2蛋白的定位特异性改造

• 作者: 张兴国 李翠萍 苏承刚 陈友龙 陈吉裕
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 烟草 AtCOR15A信号肽 pt-mVirD2-GFP嵌合基因 质体定位
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 技术改进
• 页码范围: 331-336
• 分类号: S188
• 字数: 3740字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2012.03.015

摘要

农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)VirD2蛋白具有与单链T-DNA(ssT-DNA)共价结合并将其转运至植物细胞核,将外源基因高效整合进核基因组的功能；如果将该蛋白改定位于质体,则有可能利用其将外源基因携带进质体,建立质体转化新方法.本研究对VirD2蛋白的定位信号进行了改造,采用重叠延伸PCR突变技术对Vir2的N端核定位信号(NLS)编码序列进行点突变,对C端编码序列实施缺失突变,并在合成的突变VirD2(mVirD2)基因3’端连接上增强绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因,在其5’端加上或不加源自拟南芥(A rabidopsis thaliana)冷调节基因(AtCOR15A)的质体定位信号肽编码序列,分别构成pt-mVirD2-eGFP和mVirD2-eGFP嵌合基因,由CaMV 35 S启动子控制,经农杆菌介导整合进烟草(ic otiana tab ac um)核基因组.荧光检验显示,mVirD2带质体定位信号时绿色荧光集中于叶绿体,mVirD2不带质体定位信号时绿色荧光弥散在细胞质中,且两者的细胞核均无荧光,表明pt-mVirD2-eGFP嵌合基因表达的蛋白具有质体定位特性,并失去了核定位能力.该结果为今后探讨利用pt-mVirD2融合蛋白将外源DNA主动定向牵引进质体,实现质体高效转化研究提供基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈友龙		1	0	0.0	0.0
2	陈吉裕		1	0	0.0	0.0
3	李翠萍		1	0	0.0	0.0
4	苏承刚		1	0	0.0	0.0