钩端螺旋体毒性蛋白VapC核酸酶活性及其对宿主细胞毒性作用的研究

• 作者: 严杰 李立伟 林旭瑷 辛晓阳
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 致病性钩端螺旋体 毒素-抗毒素系统 毒性蛋白 核酸酶活性 细胞毒性
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 衣原体及螺旋体
• 页码范围: 166-171
• 分类号: R135.2
• 字数: 5129字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2012.02.015

摘要

目的 了解钩端螺旋体毒素-抗毒素系统中毒性蛋白VapC的功能及其对宿主细胞的毒性作用.方法 以致病性问号钩体黄疸出血群赖型赖株基因组DNA为模板,采用PCR扩增全长vapB、vapC、vapBC基因并构建其原核表达系统.采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rVapB和rVapC 表达情况,Ni-NTA亲和层析柱提纯rVapB和rVapC.检测rVapB和rVapC有无水解问号钩体赖株及THP-1细胞DNA或RNA活性.分别采用实时荧光定量PCR和Western blot试验,检测问号钩体赖株感染THP-1细胞前后vapB和vapC基因转录及表达水平的变化.构建vapB和vapC基因真核表达载体并转染细胞,采用CCK-8试剂检测VapB和VapC蛋白对细胞活性的影响.结果 所克隆的vapB和vapC基因核苷酸及氨基酸序列与文献报道完全相同.所构建的原核表达系统能分别表达rVapB 和rVapC.rVapC可水解RNA,但不水解DNA.问号钩体赖株感染THP-1细胞后,vapB和vapC基因 转录及表达水平均显著上调,部分毒性蛋白VapC外分泌.转染vapC基因的人肾小管上皮细胞HEK293大量死亡.结论 问号钩体赖株VapC蛋白为RNA酶,可在感染宿主细胞过程中外分泌并对细胞有明显毒性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严杰	浙江大学医学院病原生物学系	265	1149	14.0	20.0
2	李立伟	浙江大学医学院病原生物学系	34	277	7.0	15.0
3	林旭瑷	浙江大学医学院病原生物学系	28	47	4.0	5.0
4	辛晓阳	浙江大学医学院病原生物学系	1	2	1.0	1.0