赖型钩端螺旋体017株外膜蛋白LipL32基因重组质粒的构建及其细胞毒性的研究

• 作者: 商正玲 张会东 王中平 钟琪 鲍朗 黄毕
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 钩端螺旋体 外膜蛋白 LipL32 表达 细胞毒性
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 347-350
• 页数: 4页
• 分类号: R377.5
• 字数: 3010字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2008.03.001

摘要

目的 构建赖型钩端螺旋体(钩体)017株外膜蛋白LipL32基因的重组质粒,并研究其细胞毒性.方法 从钩体017株全基因组中用PCR方法扩增出目的基因,双酶切构建重组质粒,转化大肠杆菌,诱导表达LipL32蛋白,将表达的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,Western Blotting鉴定其免疫原性.将目的蛋白纯化、复性后作用于ECV304细胞,通过检测细胞的乳酸脱氢酶(LDH)、NO释放量研究其细胞毒性.结果 扩增出816 bp的LipL32基因,重组质粒经双酶切、PCR鉴定、测序均表明重组载体构建成功.经IPTG诱导表达的融合蛋白相对分子质量约52×103,主要以包涵体的形式表达,经免疫动物制备得到多克隆抗体,ELISA检测效价达1:32 000,Western Blotting显示在目的蛋白位置处有特异性阳性条带.经过LipL32蛋白作用的ECV304细胞LDH、NO释放量和对照组比较有明显升高.结论 成功构建LipL32基因重组质粒,该质粒能在大肠杆菌中表达.表达的目的蛋白对细胞有一定的毒性效应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	鲍朗	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	84	212	7.0	10.0
2	张会东	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	42	109	6.0	8.0
3	黄毕	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	13	11	3.0	3.0
4	钟琪	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	25	12	2.0	3.0
5	商正玲	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	16	13	2.0	2.0
6	王中平	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	3	4	1.0	2.0