钩端螺旋体外膜蛋白LipL32的重组表达及在ELISA检测中的初步应用

• 作者: 于长明 孙岩松 战大伟 杨敬 范薇 贺争鸣 隋丽华
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 钩端螺旋体 外膜蛋白 重组表达 ELISA
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 481-484,488
• 页数: 5页
• 分类号: R377
• 字数: 3617字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2004.06.006

摘要

目的构建L32-pQE32重组质粒,诱导表达重组钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL32,建立以重组外膜蛋白为基础的抗体间接ELISA检测方法.方法采用PCR法从钩端螺旋体DNA中获取编码LipL32的基因片段,构建重组克隆载体pGEM-T/L32和表达载体L32-pQE32,转化受体菌E.coliDH5α和E.coliM15,IPTG诱导表达重组LipL32蛋白.Ni-NTA亲和层析纯化重组LipL32蛋白.以纯化的重组LipL32蛋白为抗原,特异的钩体抗血清进行ELISA实验.结果扩增出约750bp的LipL32成熟蛋白基因,LipL32基因插入pQE32表达载体,表达产物6个组氨酸与LipL32蛋白的融合蛋白相对分子量约为31kDa,与预期27.6kDa大小一致.SDS-PAGE电泳显示:LipL32蛋白主要以包涵体形式表达.ELISA显示LipL32蛋白能与钩体抗血清特异结合.方阵滴定试验确定以100ng/孔包被酶标板,酶标抗体稀释度1∶20 000作为工作浓度.结论 LipL32蛋白能在大肠杆菌中表达,Ni-NTA亲和层析可有效纯化重组LipL32蛋白,重组LipL32蛋白具有结合活性.初步建立了以重组LipL32蛋白为抗原的钩端螺旋体抗体间接ELISA检测方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贺争鸣		122	809	15.0	21.0
2	杨敬	军事医学科学院实验动物中心	30	191	8.0	12.0
3	孙岩松	军事医学科学院实验动物中心	61	434	12.0	18.0
4	于长明	军事医学科学院微生物流行病研究所	29	191	7.0	13.0
5	范薇	军事医学科学院实验动物中心	23	88	6.0	8.0
6	隋丽华	军事医学科学院实验动物中心	32	203	9.0	13.0
7	战大伟	军事医学科学院实验动物中心	23	152	7.0	11.0