赖型钩端螺旋体外膜蛋白真核表达载体构建及表达的初步研究

• 作者: 张会东 晏菊芳 李学敏 胡昌华 鲍朗
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 钩端螺旋体 质粒 真核细胞 表达
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 23-27
• 页数: 5页
• 分类号: R377+.5
• 字数: 4202字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2002.04.008

摘要

目的测定所克隆的强毒力赖型钩端螺旋体OmpL1基因的序列,构建能够在哺乳动物细胞中表达赖型钩体OmpL1外膜蛋白的重组质粒.方法首先对自行构建的含有赖型钩端螺旋体OmpL1基因的重粗质粒pAC-OmpL1进行插入片段的序列分析,然后将该质粒略作修改,使更适于在真核细胞中表达目的蛋白,同时将OmpL1基因亚克隆入另一个质粒pcDNA3中,采用限制性内切酶分析所得质粒的正确性.最后以脂质体转染法将两个重组质粒转入COS7细胞,以RT-PCR分析导入质粒的表达.结果 pAC-OmpL1 中插入的赖型钩体OmpL1基因全长960bp,具有完整的阅读框架,与流感伤寒型钩体OmpL1基因同源性达88%.限制性内切酶分析显示,质粒pAC-OmpL1的修改已达目的,OmpL1基因也按正向插入到pcDNA3中.RT-PCR结果显示,重组质粒转染组在约1kb处出现特异的扩增带,而空白质粒载体组无此条带.结论赖型钩端螺旋体OmpL1基因与流感伤寒型的高度同源,该基因已成功地插入到两个真核表达质粒载体中,而且这两个重组质粒均能在哺乳动物细胞中表达OmpL1基因的mRNA.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	晏菊芳	华西医科大学感染免疫研究室	7	52	4.0	7.0
2	鲍朗	华西医科大学感染免疫研究室	10	73	5.0	8.0
3	胡昌华	华西医科大学感染免疫研究室	7	64	4.0	7.0
4	李学敏	华西医科大学感染免疫研究室	5	39	3.0	5.0
5	张会东	华西医科大学感染免疫研究室	8	52	4.0	7.0