赖型钩端螺旋体OmpA外膜基因Loa22重组卡介苗的构建及其免疫蛋白表达

• 作者: 孙湛 张英 李道坤 鲍朗
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 赖型钩端螺旋体 外膜蛋白A Loa22 重组卡介苗 免疫保护
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 189-193
• 页数: 5页
• 分类号: R377.5
• 字数: 4394字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2010.02.001

摘要

目的 以赖型钩端螺旋体外膜蛋白A(OmpA)膜蛋白基因Loa22去信号肽基因片段构建重组卡介苗并对其免疫蛋白进行表达分析.方法 以赖型钩端螺旋体56601株全基因组DNA为模板,PCR扩增出Loa22成熟肽基因片段,与大肠杆菌-结核分枝杆菌穿梭整合质粒pMV361一起分别经过双酶切,连接,转化.筛选鉴定出阳性重组质粒rpMV361-loa22,电转化入BCG,经筛选鉴定后,热诱导表达,通过SDS-PAGE及Western Blotting鉴定其表达产物.分别用BCG、rBCG-pMV361、rBCG-loa22、Loa22蛋白、灭活全钩体免疫小鼠两次后,脱臼处死小鼠分离脾淋巴细胞,XTT比色法检测体外脾淋巴细胞增殖活性.结果 PCR扩增获得516 bp的片段,成功构建重组穿梭质粒rpMV361-loa22,经电转化构建重组卡介苗成功,热诱导表达出相对分子质量约19×10~3特异条带.体外脾淋巴细胞增殖实验证实rBCG-loa22可引起细胞反应,其增殖活性与BCG组和rBCG-pMV361组相比差异具有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建了赖型钩端螺旋体重组卡介苗rBCG-loa22并高效表达具有免疫学活性的外膜蛋白Loa22,为新一代钩端螺旋体疫苗研究打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	鲍朗	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	84	212	7.0	10.0
2	张英	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	16	54	3.0	7.0
3	孙湛	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	3	3	1.0	1.0
4	李道坤	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	3	3	1.0	1.0