赖型钩端螺旋体溶血素HlyX基因的克隆、表达及其细胞毒效应

• 作者: 商正玲 王中平 钟琪 鲍朗 黄毕
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 钩端螺旋体属 溶血素类 细胞毒性 基因,HIyX
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2200-2203
• 页数: 4页
• 分类号: R363
• 字数: 4185字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2008.11.025

摘要

目的:克隆、表达HlyX基因并研究其细胞毒性效应.方法:从赖型钩端螺旋体017株全基因组中用PCR方法扩增出目的基因,双酶切构建重组质粒,转化E.coliJM109,诱导表达HlyX;将表达的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,Western blotting鉴定其免疫原性;将目的蛋白纯化、复性后作用于ECV304细胞,通过检测ECV304细胞乳酸脱氢酶(LDH)和一氧化氮(NO)的释放量研究目的蛋白的细胞毒性效应.结果:扩增出1179 bp的目的基因HlyX,重组质粒经双酶切、PCR鉴定,测序结果表明重组质粒构建成功.经IPTG诱导表达的融合蛋白约64 kD,主要以包涵体的形式表达,经免疫动物得到多克隆抗体,ELISA检测效价达1:64 000;Westernblotting鉴定在目的蛋白的位置处有特异性阳性条带.经过HlyX融合蛋白作用的ECV304细胞LDH和NO释放量明显高于对照组(P＜0.01).结论:HlyX能在大肠杆菌中表达,表达的目的蛋白对细胞有毒性效应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	鲍朗	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	84	212	7.0	10.0
2	黄毕	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	13	11	3.0	3.0
3	钟琪	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	25	12	2.0	3.0
4	商正玲	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	16	13	2.0	2.0
5	王中平	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	3	4	1.0	2.0