EphA1基因可控性双稳转内皮祖细胞系EPCsTet-On-EphA1SiRNA的建立

• 作者: 余正平 周蒙滔 施红旗 杨文军 王怡 金炜东 陈钢
• 来源期刊: 肝胆胰外科杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 内皮祖细胞 EphA1 可调控表达 Tet-on系统
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 220-223
• 分类号: Q78
• 字数: 3425字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-1954.2012.03.014

摘要

目的 建立可调控EphA1基因表达的内皮祖细胞系EPCsTetOn-EphAl1SiRNA.方法 将pWHE146质粒转染到内皮祖细胞系中,筛选出稳定表达的细胞克隆；扩增后瞬时转染pTRE-hyg-luc质粒,强力霉素诱导表达后,检测荧光素酶活性,挑选出高表达、低背景的受强力霉素调控的EPCsTet-On细胞株；再将重组质粒pTRE-EphA1SiRNA转染入EPCsTet-On细胞株,筛选出稳定表达细胞克隆EPCsTer-On·EphAlSiRNA;通过强力霉素诱导后,利用RT-PCR和Western blotting法检测EphA1基因mRNA与蛋白的表达.结果 成功构建了受强力霉素调控的高表达低背景的EPCsTet-On-EphA1SiRNA细胞株；强力霉素可诱导EPCsTet-On-EphA1SiRNA细胞株中EphA1mRNA表达下调,较之未调控组其差异有统计学意义(P＜0.05)；强力霉素调控EphA1蛋白表达的能力在一定范围内呈剂量依赖性关系.结论 成功建立强力霉素调控EphA1基因表达的大鼠双稳转内皮祖细胞系EPCsTet-On-EphA1SiRNA,为深入研究EphA1基因在内皮祖细胞参与肝癌血管生成过程中的作用提供了有效的实验手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	施红旗	温州医学院第一附属医院肝胆外科	74	409	12.0	16.0
2	周蒙滔	温州医学院第一附属医院肝胆外科	75	446	11.0	15.0
3	杨文军	温州医学院第一附属医院肝胆外科	22	98	5.0	9.0
4	金炜东	广州军区武汉总医院普外科	49	269	9.0	13.0
5	余正平	温州医学院第一附属医院肝胆外科	42	167	8.0	10.0
6	王怡	温州医学院环境与公共卫生学院	16	44	3.0	6.0
7	陈钢	温州医学院第一附属医院肝胆外科	13	35	3.0	5.0