变异链球菌LuxS基因缺陷突变株的构建及其生物膜结构的初步观察研究

• 作者: 张耀超 韩福胜 韩育植
• 来源期刊: 牙体牙髓牙周病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 变异链球菌 LuxS基因 突变株 生物膜
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 309-313,322
• 页数: 6页
• 分类号: R780.2
• 语种: 中文

摘要

目的:通过同源重组法构建变异链球菌LuxS基因缺陷突变菌株,比较其与变异链球菌UA159标准株在生物膜形成上的差异.方法:运用基因同源重组方法将氯霉素抗性基因(Cmr)与LuxS基因上下游区域的2个基因片段按一定顺序重组到PUC载体的多克隆位点中,构建出带氯霉素抗性标志的重组质粒,将载体质粒转化到含完整LuxS基因的变异链球菌UA159中,利用氯霉素抗性筛选出LuxS基因缺陷的突变株,并利用聚合酶链式反应(PCR)和哈氏弧菌发光实验进行检测.以釉质磨片为载体,在扫描电镜下观察上述两菌株含有20g/L葡萄糖、20g/L蔗糖的乳酪消化胨酵母(TPY)液体培养基中形成24h的生物膜.结果:PCR基因扩增结果显示:突变株LuxS基因已被Cmr基因完全替换,成功的构建了变异链球菌LuxS基因突变株,并且突变株不能诱导哈氏弧菌BB170的生物发光.当用葡萄糖作为补充糖源时,变异链球菌UA159标准株和LuxS基因突变株所形成的生物膜表现型未见明显差异；而用蔗糖作为补充糖源时,两菌株所形成的生物膜有明显不同,UA159生物膜相对平滑均质,而LuxS基因突变株生物膜呈松散的蜂房状,基质间有较大的间隙,形成较大的团簇状菌落.结论:成功构建出LuxS基因缺陷的变异链球菌突变株,与变异链球菌UA159标准株其生物膜结构发生改变,提示LuxS会影响变异链球菌生物膜的形成.