离子对高效液相色谱法测定人体红细胞内核苷二磷酸激酶活性

• 作者: 刘亚妮 师少军 曾繁典 沈如飞
• 来源期刊: 中国医院药学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 核苷二磷酸激酶 活性 红细胞 反相离子对高效液相色谱法
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 252-255
• 分类号: R927.2
• 语种: 中文

摘要

目的:建立测定人体红细胞(RBC)内核苷二磷酸激酶( NDPK)活性的反相离子对高效液相色谱法.方法:稀释RBC中加入反应底物(dADP和dGTP)及其他反应混合液后,37℃孵育5 min,100℃灭活10 min,离心取上清液进样分析.以反应产物dATP定量分析NDPK活性.色谱柱为SymmetryShield TM RP18(150 mm×3.9mm,5μm),检测波长为260 nm,柱温为25℃；采用梯度洗脱,流动相A为20 mmol·L-1 KH2 PO4-K2 HPO4缓冲液、加入离子对试剂5mmol· L-1四丁基硫酸氢铵(TBAHS)溶液,流动相B为乙腈.结果:NDPK催化反应dADP+ dGTP←→dATP+ dGDP反应特异性良好,RBC内dATP的线性范围为4.33～43.34 μmol·L-1(r2=1.000),定量下限为4.33 μmol·L-1.日内及日间RSD分别小于5.53％和6.69％,准确度为98.4％～104.2％,平均绝对回收率大于83％；dATP样品在室温或4℃、- 80℃保存30d及反复冻融3次稳定性良好.结论:该法操作简便快速、灵敏、专属性强,可应用于人体RBC内NDPK活性测定,为研究NDPK活性与嘌呤类药物反应相关性提供基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	师少军	华中科技大学同济医学院附属协和医院药剂科	94	557	14.0	19.0
2	曾繁典	华中科技大学同济医学院临床药理研究所	167	2185	25.0	40.0
3	刘亚妮	华中科技大学同济医学院附属协和医院药剂科	65	241	9.0	12.0
4	沈如飞	华中科技大学同济医学院附属协和医院药剂科	5	32	3.0	5.0