适于烟草脆裂病毒诱导的本氏烟基因沉默分析的对照载体构建

• 作者: 徐幼平 徐秋芳 程维舜 蔡新忠 黎飞
• 来源期刊: 浙江大学学报（农业与生命科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 烟草脆裂病毒 基因沉默 对照载体 pYL156∶∶eGFP pYL156∶∶NIRi
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 生物科学与技术
• 页码范围: 10-20
• 分类号: Q943.2|S43
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9209.2012.01.002

摘要

对烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)诱导的基因沉默分析体系中目前最常用的对照载体——空pYL156载体(pYL156∶∶00)对沉默处理后番茄和本氏烟(Nicotiana benthamiana)植株的病毒症状和生长影响进行分析.结果表明:pYL156∶∶00沉默处理后的番茄和本氏烟植株均表现出严重的系统性病毒症状,生长受到显著抑制,因此,pYL156∶∶00并不是一个用于TRV诱导的番茄和本氏烟基因沉默分析的好的对照栽体；为获得更好的对照载体,试验构建了2个新的对照载体pYL156∶∶NIRi和pYL156∶∶eGFP,它们分别通过在pYL156∶∶00载体多克隆位点插入253 bp菜豆亚硝酸还原酶基因内含子序列和400 bp eGFP基因片段而获得,对这2个对照载体对沉默处理后本氏烟植株的病毒症状和生长情况的影响与pYL156∶∶00进行比较分析.结果表明:pYL156∶∶00沉默处理后的植株表现出较严重的系统性病毒症状,生长受到显著抑制,其中26.7％植株死亡；pYL156∶∶NIRi沉默处理后的植株也表现出明显的病毒症状以及生长受抑制现象,但与pYL156∶∶00相比,所受影响较小,只有13.3％植株死亡；而pYL156∶∶eGFP沉默处理后的植株不表现明显的病毒症状,植株生长也不受显著影响；病毒积累量检测结果显示,3个对照载体沉默处理的植株病毒症状和生长受抑制情况与植株体内TRV病毒的积累水平密切相关.这些结果表明,新构建的pYL156∶∶eGFP可以作为一个优越的对照载体应用于TRV诱导的基因沉默分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡新忠	浙江大学生物技术研究所	22	352	9.0	18.0
5	徐幼平	浙江大学分析测试中心	19	368	10.0	19.0
6	黎飞	浙江大学生物技术研究所	5	52	3.0	5.0
7	徐秋芳	浙江大学生物技术研究所	5	93	3.0	5.0
8	程维舜	浙江大学生物技术研究所	2	48	2.0	2.0