基于黄瓜花叶病毒(CMV)基因沉默载体的构建

• 作者: 廖乾生 施伟 杜志游 程晓东
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 黄瓜花叶病毒(CMV) 农杆菌侵染性克隆 病毒诱导的基因沉默(VIGS)
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1550-1558
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2015.12.003

摘要

病毒介导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)广泛应用于植物基因功能分析.本研究以黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)不同株系的RNA2与CMV-Fny基因组R1和R3进行组合接种,获得在本氏烟(Nicotiana benthamiana)中症状轻的病毒组合F1TshR2F3;将CMV-Fny基因组R1、R2、R3和Tsh2克隆到植物瞬时表达载体pCB301中,构建载体pCB301-R1R2R3.农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)浸润接种本氏烟结果显示,pCB30 1-R1R2R3引起寄主症状与病毒cDNA体外转录产物侵染所产生症状一致;TshR2的2b基因缺失3'端的95 nt碱基(Tsh2VIGS)后病毒能系统性侵染寄主植物,但降低病毒外壳蛋白(coat protein,CP)含量;F1TshR2VIGS-Su351F3接种10d后整个植株的大部分叶片出现黄色表型;qRT-PCR结果表明,pCB301-F 1TshR2VIGS-Su351 F3接种植株中的镁离子螯合镁亚基基因Sulphur mRNA含量为对照植株20％.为进一步验证该载体能否沉默植物中其他基因,将烟草中细胞自噬相关基因Beclin1 基因部分序列插入载体pCB301-TshR2ⅥGS并接种于NN三生烟(N.tabacum cv.Xanthi NN)中,烟草花叶病毒(Tobacco,mosaic virus,TMV)侵染结果表明,F1TshR2VIGS-Beclin337F3浸润接种寄主呈现系统性坏死症状反应,而对照植株仅在TMV接种区域产生局部枯斑.本研究所获得的CMV农杆菌侵染性克隆及其VIGS载体,为构建CMV其他寄主的VIGS载体奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	廖乾生	浙江理工大学生命科学院	15	33	4.0	5.0
2	杜志游	浙江理工大学生命科学院	18	77	4.0	8.0
3	程晓东	浙江理工大学生命科学院	4	11	2.0	3.0
4	施伟	浙江理工大学生命科学院	2	7	2.0	2.0