鸡传染性法氏囊病毒实时qRT-PCR检测方法的建立及初步应用

• 作者: 周欣 常洪涛 杨霞 王川庆 王新卫 赵军 陈陆
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡传染性法氏囊病毒 DF-1细胞 QRT-PCR TCID50 增殖滴度
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 424-430
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

根据高效培养鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)时对病毒滴度检测的需要,本文针对IBDV VP4基因的保守序列设计并合成了一对引物,以所构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IBDV核酸载量的SYBR Green I荧光定量实时RT-PCR(qRT-PCR)方法,结果表明,其Ct值与标准品模板在4.03×101～109拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,对IBDV核酸的最低检出量为40拷贝/μL,灵敏度是常规RT-PCR检测方法的1 000倍；该方法不与其它禽源病毒发生交叉反应,批内变异系数小于0.5％.应用本方法对DF-1细胞中IBDV的增殖滴度进行了测定,并与经典的TCID50测定方法进行了比较.结果显示两种方法测定的IBDV在微载体悬浮培养和方瓶静态培养条件下DF-1细胞上的增殖曲线都具有一定的平行关系,且qRT-PCR方法比TCID50方法更加快速和敏感,更适合于对IBDV增殖滴度的实时快速测定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵军		62	259	9.0	13.0
2	王川庆		198	1212	16.0	27.0
3	杨霞		151	817	16.0	24.0
4	周欣		10	51	4.0	7.0
5	常洪涛		83	312	10.0	13.0
6	陈陆		134	819	13.0	22.0
7	王新卫		109	292	8.0	11.0