大鼠AQP7基因重组腺病毒载体的构建及其在3T3-L1脂肪细胞中的表达

• 作者: 沈飞霞 潘伟 谷雪梅
• 来源期刊: 温州医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 水通道蛋白7 重组腺病毒 3T3-L1细胞 大鼠
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 521-525
• 页数: 5页
• 分类号: Q784
• 字数: 4326字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建携带大鼠AQP7基因的腺病毒载体,并检测其在3T3-L1脂肪细胞中的表达.方法:采用RT-PCR方法,从大鼠脂肪组织中扩增克隆大鼠AQP7基因,插入到穿梭质粒中获得重组质粒pDC316-AQP7.PCR、酶切鉴定后,重组穿梭质粒和骨架质粒经脂质体2000转染293细胞出毒产生重组腺病毒.经PCR进行鉴定,转染293细胞扩增并纯化,半数组织培养感染剂量(TCID 50)方法测定腺病毒滴度.体外转染分化成熟的3T3-L1细胞,用Western blot方法检测AQP7的表达水平.结果:PCR、酶切及测序证实重组穿梭质粒构建正确.同时成功构建AQP7重组腺病毒,并制备出高滴度的病毒保存液,可以有效转染3T3-L1细胞.结论:成功构建了含大鼠AQP7基因的重组腺病毒载体且其可以在3T3-L1细胞中有效表达,为今后更好地研究AQP7在肥胖发生发展过程中的调控机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈飞霞	温州医学院附属第一医院内分泌科	93	444	10.0	14.0
2	谷雪梅	温州医学院附属第一医院内分泌科	5	33	4.0	5.0
3	潘伟	温州医学院附属第一医院内分泌科	3	13	2.0	3.0