水稻、菠菜甜菜碱醛脱氢酶(BADH)重组蛋白表达及酶活性分析

• 作者: 余进德 刘永胜 牛向丽 罗笛
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 水稻 菠菜 甜菜碱醛脱氢酶 原核表达 酶活测定
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1390-1397
• 页数: 8页
• 字数: 5638字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2012.12.005

摘要

本研究目的是通过基因克隆、原核表达和蛋白纯化技术获得水稻(Oryza sativa subs.japonica)、菠菜(Spinacia oleracea)甜菜碱醛脱氢酶基因(OsBA DH和SpBADH)的融合蛋白,体外测定两者的醛脱氢酶活性,说明水稻存在OsBADH且具有醛脱氢酶功能.通过RT-PCR成功克隆了OsBADH和SpBADH基因的全长序列,二者氨基酸序列同源性为70.8％.OsBADH和SpBADH的重组质粒均可在大肠杆菌(Escherichia coli)菌株BL21(DE3)中表达,SDS-PAGE分析表明,经0.4 mmol/L IPTG诱导的融合蛋白条带约70 kD.两者的表达产物经TALON金属螯合树脂纯化后进行酶活测定,结果显示都具有甜菜碱醛脱氢酶活性.OsBADH的比活力为74.87 nmol/min/mg,对照SpBADH比活力为86.84 nmol/min/mg,表明OsBADH能够有效行使醛脱氢酶功能,而高效液相色谱法未在水稻叶片中检测出甜菜碱.研究结果提示,水稻可能并非由于BADH自身不具有酶活而不积累甘氨酸甜菜碱,该研究为进一步探讨水稻中甜菜碱合成的分子机制提供了研究基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	牛向丽	合肥工业大学生物与食品工程学院	14	76	5.0	8.0
2	罗笛	四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室	1	4	1.0	1.0
3	余进德	四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室	3	11	3.0	3.0
4	刘永胜	四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室	27	88	5.0	8.0