新生大鼠视网膜Müller细胞原代培养方法的改良

• 作者: 杨琨 董方田
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Müller细胞 细胞培养 视网膜
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 336-339
• 分类号: R-33
• 字数: 3198字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2012.04.012

摘要

背景 目前,视网膜Müller细胞的干细胞特性日益受到关注,优化Müller细胞的培养方法对视网膜干细胞治疗的进一步研究具有重要意义. 目的 对视网膜Müller细胞的原代培养方法加以改良,建立一种简单、有效的实验室分离纯化Müller细胞的方法.方法 取新生SPF级SD大鼠眼球,培养基浸泡后室温条件下避光过夜,显微镜下分离视网膜,直接吹打成微小组织悬液后接种于培养瓶中,8～10d后行第1次换液,之后2～3d换液1次,至细胞完全融合后进行传代.细胞形态一致后于光学显微镜下观察细胞的形态特征,免疫荧光法检测Müller细胞标志物谷氨酰胺合成酶(GS)和波形蛋白(Vimentin)的表达,进行细胞鉴定；采用流式细胞术对所得细胞进行纯度检测. 结果 原代培养的Müller细胞胞体狭长,细胞质丰富.传至3代的细胞95％以上对GS和Vimentin反应阳性,阳性染色主要位于细胞质和细胞核.Vimentin阳性染色主要位于细胞质.流式细胞仪检测显示传3代后99.7％的细胞GS表达阳性. 结论 采用Müller细胞改良法-流式细胞术对所得细胞进行纯度检测,简单可行,收获的细胞数量多、纯度高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董方田	中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院眼科	53	264	9.0	13.0
2	杨琨	中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院眼科	2	7	2.0	2.0