兜兰二氢黄烷酮醇-4-还原酶基因的克隆及其表达特性

• 作者: 吕复兵 孙映波 操君喜 朱根发 李冬梅 王真
• 来源期刊: 内蒙古农业大学学报（社会科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 兜兰 二氢黄烷酮醇-4-还原酶基因 RT-PCR 基因克隆 表达分析
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 园艺—研究报告
• 页码范围: 203-210
• 分类号: S682.31
• 字数: 3747字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-4458.2012.05.037

摘要

克隆同色兜兰二氢黄烷酮醇-4-还原酶基因DFR,分析其序列特征,了解其在不同组织部位的表达情况.采用RT-PCR和RACE技术从花中克隆DFR的全长cDNA,用生物信息学方法分析序列特征,并用半定量RT-PCR研究其在不同组织的表达.分离到DFR,该cDNA全长1267bp,具有1个1074 bp的完整开放阅读框,编码357个氨基酸.序列分析表明,该DFR蛋白含有1个NADB_Rossmann superfamily保守结构域,1个NADP(H)结合域和1个底物特异性结合域,其与文心兰、石斛兰和大花蕙兰等的DFR同源性在75％～80％.系统进化树显示,该DFR蛋白与兰科植物的DFR蛋白亲缘关系比较近.半定量RT-PCR表明,该DFR在成熟花和营养叶中的表达量最高,在子房、苞叶、萼片和花瓣中的表达量相当,在唇瓣中的表达量次之,在蕊柱中的表达量较唇瓣中的低,在花茎中的表达量最低,在根中几乎检测不到.原核表达结果表明,该DFR在大肠杆菌中获得表达.从兜兰中克隆到花色代谢途径中的关键酶基因DFR,该基因可能参与调控花色素的合成.