SIP1在人舌癌Tca8113细胞中的定位和融合蛋白表达鉴定的研究

• 作者: 代炜 徐中飞 秦兴军 谭学新
• 来源期刊: 口腔医学
• 学科: 医学
• 关键词: SIP1 舌癌 融合蛋白 免疫沉淀
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 基础与临床研究
• 页码范围: 577-580
• 页数: 4页
• 分类号: R739.86
• 字数: 2692字
• 语种: 中文

摘要

目的 检测Smad相互作用蛋白1(SIP1)在人舌癌Tca8113细胞系中的定位及融合蛋白的表达鉴定.方法 PCR扩增SIP1编码序列的全长,克隆到pCMV-Flag-MAT-Tag 1载体.利用共聚焦激光扫描显微镜观察SIP1和SIP1-Flag在人舌癌Tca8113细胞系中定位,并将构建好的Flag标签SIP1(SIP1 -Flag)真核表达载体转染到人舌癌Tca8113细胞系中,提取蛋白进行Western blot检测,利用Flag标签抗体进行免疫沉淀纯化SIP1-Flag融合蛋白.结果 构建了SIP1-Flag真核表达载体.SIP1和SIP1-Flag融合蛋白主要定位于人舌癌Tca8113的细胞核中,Western blot检测到SIP1-Flag融合蛋白表达,且在人舌癌Tca8113细胞中成功纯化SIP1-Flag蛋白.结论 成功构建真核表达载体.SIP1和SIP1-Flag主要定位于细胞核,成功鉴定融合蛋白表达并纯化SIP1-Flag融合蛋白.