单环刺螠硫醌氧化还原酶间接竞争ELISA检测方法的建立

• 作者: 史晓丽 张志峰 张立涛 李阳 董英萍 马玉彬
• 来源期刊: 中国海洋大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 单环刺螠 硫醌氧化还原酶 间接竞争ELISA 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 64-69
• 分类号: Q789
• 字数: 5437字
• 语种: 中文

摘要

硫醌氧化还原酶(Sulfide:quinone oxidoreductase,SQR),是线粒体硫化物代谢的关键酶.本研究以生活在潮间带下区及潮下带中的底栖生物一单环刺螠SQR重组蛋白为材料,建立了单环刺螠SQR间接竞争ELISA检测方法,为定量分析SQR蛋白水平表达奠定了基础.将SQR重组蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,检测效价高达1:64000.采用免疫印迹实验,将该抗体与重组蛋白和体壁总蛋白杂交,均得到了单一的条带,表明该抗体特异性好.优化SQR间接竞争ELISA检测条件,得出最佳的抗原包被浓度为250 ng/mL,一抗浓度为1∶20000,二抗浓度为1∶12000,此条件下建立的标准曲线检测范围为2.5～1000 ng/mL.精确度检测结果显示,批内差异在0.42％～7.27％、批间差异在2.58％～7.78％范围内,表明该条件下精确度具有良好的准确性和重复性.以上结果表明,已成功建立单环刺螠SQR间接竞争ELISA检测方法.