甲型H1N1流感病毒NA蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备

• 作者: 刘晋洪 姚思敏 张国良 杨榕青 杨辉 林巧 聂广 邓小凤 郑学宝
• 来源期刊: 深圳中西医结合杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 甲型H1N1流感病毒 神经氨酸酶 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 实验论著
• 页码范围: 269-272,284
• 分类号: R511.7
• 语种: 中文

摘要

目的:利用原核系统表达甲型H1N1流感病毒NA蛋白,制备NA特异性单克隆抗体.方法:采用RT-PCR技术扩增A/Shenzhen/71/09病毒株NA基因,通过原核表达系统表达含6×His标签NA重组蛋白,利用镍离子亲和柱进行纯化.使用NA蛋白以100 μg/只剂量免疫BALB/C小鼠,3次免疫后,利用杂交瘤技术筛选分泌NA特异性单克隆抗体的细胞株,采用Western-blot方法对单抗进一步验证.结果:成功克隆A/Shenzhen/71/09 NA基因,长度约1400 bp.将NA基因克隆入原核表达载体pET-21b(+),经IPTG诱导后在大肠杆菌包涵体中检测到目的蛋白,分子量约50 kd.采用尿素变性处理后借助6×His标签对蛋白进行纯化.用纯化蛋白免疫小鼠,将脾细胞与SP2/0细胞融合,使用ELISA检测细胞上清NA抗体,共筛选1株持续分泌NA抗体的杂交瘤细胞株7C11.Western-blot验证该单克隆抗体可以特异性结合NA抗原.结论:成功表达甲型H1N1流感NA蛋白,获得1株分泌NA抗体的单克隆细胞株,从而为后续甲流诊断及疫苗研制奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑学宝		90	925	18.0	27.0
2	张国良		50	165	7.0	8.0
3	林巧		14	44	4.0	6.0
4	聂广		45	232	8.0	11.0
5	姚思敏		11	59	4.0	7.0
6	杨榕青		8	14	2.0	3.0
7	杨辉		11	27	3.0	5.0
8	邓小凤		7	33	2.0	5.0