微小隐孢子虫LAMP检测方法的探索

• 作者: 史亚东 宁长申 张龙现 王荣军 菅复春 董海聚
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 微小隐孢子虫 环介导等温扩增 检测 PCR
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1195-1201
• 页数: 7页
• 分类号: S855.9+9
• 字数: 4986字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2012.12.008

摘要

目的 为快速检测微小隐孢子虫,建立并优化了以SYBR Green I显色的环介导等温扩增快速检测隐孢子虫的方法.方法 根据微小隐孢子虫18S rRNA基因的4条特异LAMP引物,设计2条环引物,建立了微小隐孢子虫LAMP检测方法.结果 该方法省去95 ℃热变性和80 ℃酶失活过程,其最佳反应温度和时间是63 ℃和60 min,Betaine、MgSO4、dNTP Mixture、Bst DNA聚合酶大片段的最佳浓度分别是0.8 mol/L、8 mmol/L、0.8 mmol/L、8U/25 μL,内外引物浓度分别为1.2 μmol/L、0.2 μmol/L,添加环引物后体系反应时间缩短为20 min.对贾第虫、肠阿米巴、柔嫩艾美耳球虫、类圆线虫检测为阴性.该方法简便、快速,无需特殊设备.结论 和常规PCR方法比较,LAMP检测隐孢子虫的灵敏度提高了100倍.该方法的建立为野外和临床隐孢子虫的快速检测提供技术手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	菅复春	河南农业大学牧医工程学院	146	712	14.0	18.0
2	张龙现	河南农业大学牧医工程学院	251	1359	18.0	24.0
3	宁长申	河南农业大学牧医工程学院	196	1115	16.0	22.0
4	王荣军	河南农业大学牧医工程学院	28	50	4.0	5.0
5	董海聚	河南农业大学牧医工程学院	46	77	4.0	7.0
6	史亚东	河南农业大学牧医工程学院	2	6	1.0	2.0