黑曲霉H1的cDNA文库构建及其溶磷相关基因的筛选

• 作者: 唐超西 朱昌雄 李顺鹏 龚明波
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 黑曲霉 cDNA文库 基因psgA 有机酸
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 遗传和分子生物学
• 页码范围: 311-317
• 分类号: Q933
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建溶磷黑曲霉H1的cDNA文库,并从中筛选溶磷相关基因.[方法]利用SMART技术合成黑曲霉H1的双链cDNA并将其连接于pBluescript Ⅱ SK(+)载体上,将重组质粒转化E.coli HST08,得到黑曲霉的初级cDNA文库.利用难溶磷培养基筛选具有溶磷能力的克隆子,测序并利用Blast分析基因序列.在难溶磷液体培养基中,进行克隆子对溶液pH值、可溶磷含量的影响和产有机酸实验.[结果]成功构建了黑曲霉H1的cDNA文库,其初级库容量约为5.65×106cfu/mL,重组率约为99.15％；通过难溶磷固体培养基筛选,得到具有溶磷圈的克隆子61个,其中克隆子H-54的cDNA序列长839 bp,基因编码氨基酸残基序列长179n.t.克隆子E.coli HST08 H-54在液体难溶磷培养基中培养,提高了有机酸的表达量,并增加了有机酸的种类,在培养12h后,溶液中开始产生甲酸和乙酸,在24 h后,溶液中产生苹果酸和α-酮戊二酸,培养36 h,溶液pH值由6.32降到3.93,可溶磷含量达到0.105 mg/mL.[结论]从黑曲霉H1中获得1个溶磷相关基因,将其命名为psgA.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱昌雄	中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所	114	1385	20.0	33.0
2	李顺鹏	南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物重点实验室	125	3167	30.0	50.0
3	龚明波	中国农业科学院农业资源与农业区划研究所	13	235	8.0	13.0
4	唐超西	南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物重点实验室	2	20	2.0	2.0