天使综合征致病基因UBE3a在大鼠神经元细胞中的克隆和表达检测

• 作者: 张惊宇 杨子超 王宁 王洪才 蒋玉萌 赵雪
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: UBE3a基因 天使综合征 体外神经元培养 基因表达与定位
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 神经内分泌与免疫
• 页码范围: 344-346,350
• 分类号: Q52
• 字数: 3033字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2012.04.013

摘要

目的:调取并构建含有人UBE3a基因全长cDNA的真核表达载体pEGFP-UBE3a,采用磷酸钙转染方法将构建的重组质粒在神经元细胞中表达并观察EGFP-UBE3a蛋白的亚细胞定位.方法:采用PCR技术从人胎脑组织cDNA文库中扩增UBE3a基因的ORF片段并进行酶切构建pEGFP-UBE3a的真核表达重组质粒.用磷酸钙转染方法将重组质粒转染入体外培养的神经元细胞,分别在体外培养8天和14天时通过倒置荧光显微镜观察重组蛋白的表达和定位情况.结果:PCR扩增获得人胎脑组织cDNA文库中UBE3a cDNA全长2559 bp,构建真核表达重组质粒pEGFP-UBE3a成功,经DNA测序与GenBank中的人UBE3a cDNA序列一致.经倒置荧光显微镜观察重组质粒的表达情况,结果显示转染重组质粒的细胞中有高水平的EGFP-UBE3a蛋白表达,且UBE3a在早期神经元的细胞质和细胞核中广泛表达,并弥散在轴突和树突,而在成熟神经元细胞核中的表达明显富集.结论:本实验成功构建了pEGFP-UBE3a真核表达质粒,EGFP-UBE3a蛋白在体外培养的神经元细胞中能够有效表达,且随着神经元的成熟逐步向核内富集,为进一步研究UBE3a基因在天使综合征发生发展中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨子超	哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科	30	95	6.0	8.0
2	张惊宇	哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科	28	71	5.0	7.0
3	王宁	哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科	62	256	8.0	13.0
4	王洪才	哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科	2	1	1.0	1.0
5	蒋玉萌	哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科	3	9	1.0	3.0
6	赵雪	哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科	6	31	2.0	5.0