大肠埃希菌中λ-Red同源重组系统介导的trp和yfp基因融合表达的研究

• 作者: 倪进婧 周爱萍 姚玉峰 陈兴
• 来源期刊: 上海交通大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: λ-Red系统 融合PCR 黄色荧光蛋白 色氨酸合成酶α亚基
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 专题报道病原微生物学
• 页码范围: 1406-1410
• 页数: 5页
• 分类号: R37
• 字数: 3438字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8115.2012.11.003

摘要

目的 为研究大肠埃希菌中色氨酸合成酶α亚基编码基因(trpA)的表达,利用λ-Red系统将trpA、黄色荧光蛋白基因(yfp)、氯霉素抗性编码基因(cat)融合片段敲入基因组中.方法将trpA、yfp、cat基因进行融合PCR,获得重组片段,转化入MG1655菌株中,利用pKD46编码的λ-Red系统将片段重组入基因组中,经PCR验证及测序鉴定正确后,荧光显微镜观察融合蛋白表达.结果 成功获得trpA-yfp-cat重组片段,转化入MG1655菌株中获得阳性克隆,经测序鉴定正确.荧光显微镜观察可见细菌胞质内弥散分布黄色荧光,表明trpA-yfp融合表达片段成功地在MG1655菌株中表达.结论 运用λ-Red系统可将trpA-yfp融合片段敲入MG1655菌株基因组中原位替换trpA基因,通过观察YFP蛋白的表达间接反映trpA基因的表达,具有不改变trpA基因自身功能和细菌生长的优点,为进一步研究大肠埃希菌色氨酸合成途径奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚玉峰	上海交通大学基础医学院病原生物学教研室	28	72	6.0	7.0
2	周爱萍	上海交通大学基础医学院病原生物学教研室	7	11	2.0	3.0
3	倪进婧	上海交通大学基础医学院病原生物学教研室	6	6	2.0	2.0
4	陈兴	华中农业大学工学院	1	0	0.0	0.0