流产型布鲁菌Omp10、Omp25蛋白的表达纯化与鉴定

• 作者: 任娟娟 刘万华 张三东 李成山 杨幼聪 王利勤 王晶钰 董睿 陈婷 马超
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 布鲁菌 Omp10 Omp25 表达 纯化 抗原性
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 560-565
• 分类号: S852.614
• 语种: 中文

摘要

获得高纯度具有生物学活性的重组布鲁菌Omp10、Omp25融合蛋白,并进行抗原性的分析。将用PCR扩增出的布鲁菌Omp10、Omp25基因片段分别克隆到原核表达载体pET-32α中,构建pET-32α-Omp10/Omp25原核表达质粒。将其转入大肠杆菌BL21（DE3）PlysS中,用IPTG诱导表达,经HisTrap HP亲和层析柱分离纯化,分别用Western-blot和间接ELISA检测产物的抗原性。基因测序及酶切鉴定证明pET-32α-Omp10/Omp25原核表达载体构建成功。SDS-PAGE表明,Omp10、Omp25融合蛋白均以包涵体的形式在大肠杆菌中高效表达。经过包涵体的变性、复性及亲和层析纯化,成功获得了大小分别为34 000和44 000的融合蛋白,与预测的相对蛋白分子质量一致。Western和间接ELISA试验证明纯化的Omp10、Omp25融合蛋白能被免疫的牛布鲁菌阳性血清所识别。结果表明,成功获得了布鲁菌Omp10、Omp25融合蛋白,且均具有一定的免疫原性,通过血清学反应证实,Omp10、Omp25蛋白为布鲁菌病临床诊断试剂盒的研制奠定了基础。