布鲁氏菌外膜脂蛋白OMP10基因的克隆表达、蛋白纯化及免疫原性研究

• 作者: 丁家波 仲跻峰 何洪彬 侯佩莉 宋玲玲 杨宏军 谢之景 马长胜
• 来源期刊: 山东农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 布鲁氏菌 脂蛋白 OMP10基因
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 生物技术信息技术
• 页码范围: 5-9
• 分类号: Q786
• 字数: 3961字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-4942.2012.08.002

摘要

根据GenBank中的牛型布鲁氏杆菌OMP10序列,设计一对引物,以布鲁氏菌疫苗株S2全基因组DNA为模板扩增OMP10基因,将目的基因克隆人pEASY -T3,经测序正确后,与载体pET - 32a(+)连接,构建重组表达质粒pET - 32a/OMP10,转化E.coli BL21( DE3),用IPTG诱导表达融合蛋白pET - 32a/OMP10,经SDS - PAGE及Western - blot分析鉴定后,采用Ni- NTA Spin Kit纯化目的蛋白,并免疫小鼠.结果表明,成功构建了含OMP10的表达载体,经多次对表达条件的优化,获得了纯度较高的目的蛋白,为进一步动物免疫试验及研究其免疫原性和抗感染保护作用奠定了基础.