切刻内切酶介导恒温扩增技术条件优化

• 作者: 张娟琨 李媛 王小慧 王纪东 詹林盛
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 切刻内切酶 恒温扩增 NEMA 核酸扩增技术
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 65-69
• 分类号: Q556
• 字数: 3469字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2012.01.017

摘要

目的 采用切刻内切酶介导恒温扩增技术(nicking enzyme mediated isothermal amplification,NEMA)扩增蜡样芽孢杆菌质粒,考察缓冲体系、温度、离子浓度等条件对扩增效率的影响.方法 通过独特的引物设计,采用NEMA技术扩增蜡样芽孢杆菌质粒,通过系列实验优化了缓冲体系、温度和离子浓度等条件,采用琼脂糖凝胶电泳观察扩增结果.结果 通过设计不同长度片段的扩增产物,证明采用NEMA技术进行恒温扩增引物设计的正确性.扩增反应中,缓冲体系的组成、扩增温度、体系镁离子及二甲基亚砜(DMSO)的浓度会影响切刻内切酶恒温扩增效率,而海藻糖添加与否在本实验中与扩增效率无关.在最优条件下,NEMA恒温扩增方法对于蜡样芽孢杆菌质粒的灵敏度达到1.7 pmol/L.结论 NEMA可以用来进行较长片段的扩增,有望成为一种常规的恒温扩增技术,应用到战时或者应急条件下的快速核酸诊断中.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	詹林盛	军事医学科学院野战输血研究所	64	450	11.0	19.0
2	王纪东		1	5	1.0	1.0
3	王小慧	军事医学科学院野战输血研究所	7	14	3.0	3.0
4	李媛	军事医学科学院野战输血研究所	11	29	3.0	5.0
5	张娟琨		1	5	1.0	1.0