全血中伤寒沙门菌RT-LAMP检测方法的建立

• 作者: 娄静 樊粉霞 王淑京 聂艳妮 闫梅英 阚飙 陈建才
• 来源期刊: 疾病监测
• 学科: 医学
• 关键词: 伤寒沙门菌 反转录-环介导等温核酸扩增技术 伤寒
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 325-329
• 分类号: R516.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2012.4.022

摘要

目的 建立反转录-环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)方法特异检测伤寒沙门菌.方法 针对伤寒沙门菌fliC-d基因设计6条特异性引物,通过优化反应条件,建立检测该靶基因的RT-LAMP方法,利用48个血清型的纯培养伤寒和非伤寒沙门菌菌株、常见非沙门致腹泻病原菌以及发热为主要症状的8种常见病原菌RNA评价该方法的特异性及敏感性,同时对伤寒沙门菌全血模拟标本进行敏感性检测,并与rRT-PCR方法的敏感性进行比较.结果 等温65℃条件下,30～60 min内可完成RT-LAMP检测反应,利用该方法检测44株伤寒沙门菌均阳性,除4种少见的非伤寒沙门菌血清型扩增阳性外,其余30种非伤寒沙门菌血清型、致腹泻的其他5种肠道致病菌以及发热为主要症状的8种常见非沙门菌也均扩增阴性.在对纯菌总RNA检测中,RT-LAMP的最低检测限为0.5 pg/反应,即97个拷贝/反应.在以全血模拟样品提取核酸为模板的检测中,敏感性达1 cfu/ml,比rRT-PCR检测低限高100倍.结论 建立了敏感性高、特异性好的RT-LAMP检测血液中伤寒沙门菌的方法,为伤寒沙门菌感染的快速诊断及不明原因发热症状的病原初步鉴别提供了简便的手段,可用于对伤寒的早期诊断、预防控制及临床治疗.