马铃薯卷叶病毒RT-LAMP检测方法的建立

• 作者: 吕和平 吴雁斌 张武 梁宏杰 王国祥 高彦萍
• 来源期刊: 核农学报
• 关键词: 马铃薯卷叶病毒 反转录环介导等温扩增 反转录聚合酶链式扩增 检测
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 植物诱变育种·农业生物技术
• 页码范围: 1943-1950
• 页数: 8页
• 字数: 5260字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11869/j.issn.100-8551.2020.09.1943

摘要

为建立一种快速准确检测马铃薯卷叶病毒(potato leafroll virus,PLRV)的方法,本研究以PLRVCP(coat protein,CP)基因ORF3保守序列为靶标,建立了PLRV反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系,并对建立的RT-LAMP检测体系的特异性、灵敏度、实际应用效果进行评估.结果 表明,建立的PLRV RT-LAMP检测方法,在62℃恒温下扩增50 min,扩增产物中加入双链嵌合荧光染色(SYBR Green Ⅰ),阳性样品颜色变为绿色,阴性样品颜色仍为褐色,可直接目测判断待检测样品是否感染PLRV.该方法只特异性检测PLRV,不与马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯S病毒(PVS)、马铃薯A病毒(PVA)和马铃薯M病毒(PVM)等其他5种马铃薯主要病毒发生交叉反应.此外,建立的PLRV RT-LAMP检测方法的灵敏度较反转录PCR(RT-PCR)方法高100倍.田间样品检测验证,该方法与标准RT-PCR方法符合率达100％.本研究建立的以SYBR Green Ⅰ为颜色指示的PLRV可视化检测RT-LAMP方法,特异、灵敏、便捷,成本低,可满足科研、基层单位对该病毒快速诊断和检测的需要.