产肠毒素大肠杆菌987P菌毛蛋白FasA亚单位的原核表达及其免疫原性

• 作者: 姜柯安 宋方洲 贺志良 马永平
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 产毒素大肠杆菌 菌毛蛋白质类 FasA亚单位 原核细胞 基因表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 疫苗研究
• 页码范围: 1102-1105
• 分类号: R378.2+1|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 表达、纯化产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC) 987P菌毛蛋白FasA亚单位,并检测其免疫原性.方法 将去掉5′端信号肽序列的fasA基因克隆至原核表达载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-fasA,转化E.coli M15,0.5 mmol/L IPTG诱导表达.表达的融合蛋白6×His-FasA经Ni-Agarose His纯化和复性后,经皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,每次100 μg,共免疫3次,间隔2周,末次免疫10 d后,摘除小鼠眼球取血,分离血清,采用间接ELISA法检测抗血清效价.结果 重组表达质粒pQE-30-fasA经PCR、双酶切和测序证实构建正确;表达的6×His-FasA融合蛋白相对分子质量约为18 500,主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的30％;纯化的蛋白纯度可达95％,浓度为0.6 mg/ml,免疫小鼠所得抗血清效价为1:125 000.结论 已成功在E.coli M15中表达了6×His-FasA融合蛋白,纯化的融合蛋白免疫原性良好,为进一步研制以双歧杆菌为表达系统的新型ETEC亚单位口服疫苗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋方洲	重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室	88	309	9.0	12.0
5	马永平	重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室	35	170	6.0	10.0
9	姜柯安	重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室	3	10	2.0	3.0
13	贺志良	重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室	3	10	2.0	3.0