甲型副伤寒沙门菌spaO-ompA融合基因构建及其表达产物免疫保护作用

• 作者: 严杰 孙一帆 岳文燕 蒋锦琴 阮萍
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 甲型副伤寒沙门菌 spaO-ompA 融合基因 重组表达 免疫原性 免疫保护性
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 152-156
• 分类号: R516.3
• 字数: 4463字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2012.02.012

摘要

目的 构建甲型副伤寒沙门菌spaO-ompA融合基因及其原核表达系统,确定重组表达产物rSpaO-OmpA免疫保护作用.方法 采用柔性肽序列连接spaO与ompA基因,构建spaO-ompA人工融合基因及其原核表达系统.采用SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶图像分析系统检测目的重组表达产物rSpaO-OmpA表达情况及其产量.采用免疫扩散法、微量肥达和Western blot法鉴定rSpaO-OmpA 抗原性和免疫反应性.采用小鼠感染模型了解rSpaO-OmpA对甲型副伤寒沙门菌致死性感染的免疫保护作用,实验中采用重组表达的SpaO( rSpaO)及OmpA(rOmpA)作为对照.结果 所构建的spaO-ompA融合基因与spaO或ompA单基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100％.所构建的原核表达系统E.coli BL21 DE3pET42a-spaO-ompA能高效表达重组融合蛋白rSpaO-OmpA.rSpaO-OmpA能与甲型副伤寒沙门菌全菌抗血清结合并产生阳性杂交信号,免疫家兔后可产生特异性抗体.100 μg或200 μgrSpaO-OmpA对甲型副伤寒沙门菌感染小鼠的免疫保护率分别为66.7％ (8/12)和83.3％ (10/12),明显高于等量rSpaO及rOmpA( P＜0.05).rSpaO-OmpA免疫小鼠血清与不同副伤寒沙门菌H抗原的凝集效价为1∶5 ～ 1∶40、与rSpaO和rOmpA及rSpaO-OmpA免疫双扩散效价为1∶1 ～1∶16.结论 人工融合重组抗原rSpaO-OmpA免疫原性和免疫保护作用较等量rSpaO或rOmpA更强.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严杰	浙江大学医学院病原生物学系	265	1149	14.0	20.0
2	蒋锦琴	浙江医学高等专科学校基础医学部	38	139	6.0	9.0
3	孙一帆	浙江医学高等专科学校基础医学部	1	0	0.0	0.0