LTB-hpaA融合基因原核表达产物的鉴定及其免疫保护作用

• 作者: 严杰 李立伟 毛亚飞 谈潘莉
• 来源期刊: 浙江大学学报（理学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌/hpaA基因 大肠杆菌/ltB基因 融合基因 克隆/表达 免疫原性/佐剂活性 动物感染模型 免疫保护
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 95-100
• 页数: 6页
• 分类号: R37
• 字数: 4181字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1008-9497.2006.01.022

摘要

分别从幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)临床菌株Y06和大肠杆菌44851株DNA中扩增ltB和hpaA基因,构建ltB-hpaA融合基因及其原核表达系统,鉴定其表达产物的免疫原性、佐剂活性及其对Hp SS1株感染小鼠的保护作用.采用PCR分别从上述菌株DNA中扩增hpaA基因和ltB基因片段,构建ltB-hpaA融合基因,T-A克隆后测定核苷酸序列.采用质粒pQE32和宿主菌E.coli M15构建ltB-hpaA融合基因表达系统,并用不同浓度的IPTG诱导表达.采用western blot和GM1-ELISA鉴定表达产物的抗原性、免疫反应性和佐剂活性.建立HpSS1株感染BALB/c小鼠模型,检测rLTB-HpaA的免疫保护效果.采用ELISA检测125例胃、十二指肠粘膜活检标本尿素酶阳性患者血清中HpaA抗体和41株Hp临床菌株HpaA表达情况.与GenBank登录的相关序列比较,所构建的ltB-hpaA融合基因核苷酸序列同源性分别为94.25%～99.71%和95.38%～99.19%.所构建的表达系统pQE32-ltB-hpaA-M15的目的重组蛋白(rLTB-HpaA)表达量高达细菌总蛋白的1/3左右.rLTB-HpaA能与Hp全菌抗体发生结合反应,免疫家兔能产生特异性抗体.GM1-ELISA结果显示rLTB-HpaA能与牛GM1结合.rH-paA免疫小鼠的保护率仅为66.7%,rLTB-HpaA免疫小鼠的保护率可增至83.3%.81.6%患者血清(102/125)HpaA抗体检测结果阳性,所有菌株均含有HpaA.本文成功地构建了itB-hpaA融合基因高效原核表达系统,所表达的rLTB-HpaA有良好的免疫原性和佐剂活性,并对Hp感染小鼠有较强的免疫保护作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严杰	浙江大学医学院病原生物学教研室	265	1149	14.0	20.0
2	毛亚飞	浙江大学医学院病原生物学教研室	41	232	9.0	12.0
3	李立伟	浙江大学医学院病原生物学教研室	34	277	7.0	15.0
4	谈潘莉	浙江大学医学院病原生物学教研室	2	9	2.0	2.0