转录因子Kaiso真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 唐娜 张迪 戴顺东 曹红一 林旭勇 王恩华 苗原
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: Kaiso 基因克隆 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 112-114,119
• 分类号: R743.2
• 字数: 2763字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0258-4646.2012.02.005

摘要

目的 构建并鉴定转录因子Kaiso的表达质粒pEGFP-Kaiso.方法 采用PCR的方法扩增pCS2-Kaiso中人Kaiso的全长序列,克隆至载体pEGFP-N1中,构建重组质粒pEGFP-Kaiso,以酶切及基因测序方法鉴定重组质粒的准确性.利用LipofectamineTM 2000将重组质粒转染至肺癌细胞系A549,24h后荧光显微镜观察绿色荧光信号,48 h后Western blot鉴定Kaiso蛋白表达变化.结果 限制性双酶切及DNA测序分析结果显示插入的DNA片段长度约为2 022 bp,与预期Kaiso基因片段大小相同.转染pEGFP-Kaiso重组质粒后,荧光显微镜观察到明确的绿色荧光蛋白(GFP)的绿色荧光信号,Western blot证实转染pEGFP-Kaiso质粒后的Kaiso蛋白表达量显著上调(P＜0.05).结论 成功构建了人Kaiso基因真核表达载体,为深入研究Kaiso的生物学功能提供了有力的实验工具.