慢病毒载体介导RNA干扰抑制大肠癌细胞HT29的酪氨酸激酶受体RON基因的表达

• 作者: 乐东海 余永明 冯伟云 卓文莹 戴晓宇 李克强 毛联钢
• 来源期刊: 上海医学
• 关键词: RON HT29细胞 RNA干扰 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 935-939,前插3
• 页数: 6页
• 语种: 中文

摘要

目的 研究慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)对大肠癌细胞RON基因的干扰效率,构建RON基因稳定沉默的大肠癌细胞株.方法 应用实时聚合酶链反应(PCR)检测大肠癌细胞DLD-1、HCT116、LOVO、RKO、SW480、HT29的RON mRNA表达情况,筛选出表达丰度能满足RNAi的大肠癌靶细胞HT29.根据人RON基因序列,构建4种慢病毒载体质粒pGCSIL/RON-短发夹RNA(shRNA),转染包装细胞293T,获得4种重组慢病毒pGCSIL/RON-shRNA,分别感染HT29细胞.应用实时PCR检测各组HT29细胞RON mRNA表达情况,筛选出RON干扰效率最高的一种shRNA慢病毒载体质粒,构建RON基因稳定沉默的大肠癌细胞株HT29/RON-shRNA.结果 DLD-1、HCT116、RKO、SW480、HT29细胞RON表达丰度能满足RNAi的需要,选择HT29细胞作为RNAi的靶细胞.阴性对照病毒感染的细胞样品相对正常未感染病毒的细胞目的基因的相对表达水平为(94±5)％,RON shRNA-1靶点病毒感染的细胞为(86±5)％,RONshRNA-2靶点病毒感染的细胞为(67±6)％,RONshRNA-3靶点病毒感染的细胞为(63±6)％,RONshRNA-4靶点病毒感染的细胞为(30±8)％,RONshRNA-4靶点病毒感染的细胞的表达水平显著低于其他细胞(P值均＜0.01),其对目的基因的沉默效果达到(70±8)％.结论 慢病毒介导RNAi能显著抑制大肠癌细胞HT29的RON基因的表达,慢病毒载体介导的RNAi是一种高效的“基因沉默”的手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李克强	宁波市第二医院肿瘤分子生物学重点实验室	23	58	4.0	6.0
2	冯伟云	宁波市第二医院肿瘤分子生物学重点实验室	17	66	5.0	7.0
3	戴晓宇	宁波市第二医院肛肠外科	24	56	4.0	6.0
4	余永明	宁波市第二医院肛肠外科	14	41	4.0	5.0
5	乐东海	宁波市第二医院肿瘤分子生物学重点实验室	7	9	2.0	2.0
6	毛联钢	宁波市第二医院肿瘤分子生物学重点实验室	19	66	5.0	7.0
7	卓文莹	宁波市第二医院肛肠外科	4	3	1.0	1.0