双特异性抗肿瘤重组腺病毒对前列腺癌细胞的抑制作用

• 作者: 刘广臣 孙丹丹 张慕淳 李霄 王金辉 金宁一 齐延新
• 来源期刊: 中华泌尿外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 前列腺癌 凋亡素 重组腺病毒 凋亡
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 549-553
• 分类号: R737.25
• 字数: 4023字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1000-6702.2012.07.022

摘要

目的 探讨结合肿瘤特异性启动子hTERTp和特异性抑癌基因Apoptin的腺病毒AdhTERTp-E1 a-A poptin (Ad-VT)对前列腺癌PC-3细胞的抑制作用. 方法 于96孔板内制备前列腺癌PC-3单层细胞(5×103个/孔),分别用100个感染复数(multiplicity of infection,M OI)、10 MOI和1 M0I的重组腺病毒Ad-VT、Ad-CMV-Apoptin(Ad-VP3)、Ad-hTERTp-El a-EGFP (Ad-GT)和Ad-CMV-EGFP(Ad-EGFP)进行感染,以未感染孔为对照,每个剂量设3个复孔.采用96 h噻唑盐(MTT)法,检测重组腺病毒对PC-3细胞的抑制作用.于6孔板制备PC-3单层细胞(1 × 106个/孔),分别用100 MOI的Ad-VT、Ad-VP3、Ad-GT和Ad-EGFP感染PC-3细胞,培养48 h后,分别应用AO/EB染色法、DAPI染色法、Annexin V检测法对PC-3细胞进行染色,在显微镜下观察细胞形态,分析Ad-VT对PC-3细胞的抑制方式；应用Caspase检测法对PC-3细胞提取总蛋白,检测Caspase酶活性,分析Ad-VT对PC-3细胞的抑制方式. 结果 MTT法结果显示除Ad-EGFP外,Ad-VT、Ad-VP3和Ad-GT均 不同程度地表现出对PC-3细胞的抑制作用,其中Ad-VT、Ad-GT的抑制作用强于Ad-VP3,差异有统计学意义(P＜0.05)；培养48、72、96 h,随着MOI的增高,Ad-VT对PC-3细胞的抑制作用具有一定剂量效应关系趋势,感染剂量为100 MOI时,Ad-VT对PC-3细胞的抑制作用具有一定时间效应关系趋势.通过AO/EB、DAPI、Annexin V检测法和Caspase酶活性检测结果显示,Ad-VT可通过诱导PC-3细胞的凋亡抑制PC-3细胞的增殖.其中AO/EB染色可观测到经Ad-VT感染的PC-3细胞呈现橘红色；DAPI染色可观测到经Ad-VT感染的PC-3细胞细胞核呈现亮蓝色,且存在核内物质碎裂；Annexin V检测法可观测到经Ad-VT感染的PC-3细胞出现磷脂膜外翻、细胞核皱缩、细胞膜通透性增加等凋亡特征；Caspase检测结果显示Ad-VT可明显上调Caspase2、3、6、8、9酶的活性. 结论 结合肿瘤特异性启动子hTERTp和特异性抑癌基因Apoptin的腺病毒Ad-VT通过细胞凋亡能有效地抑制前列腺癌PC-3细胞的生长.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金宁一		87	502	10.0	18.0
2	张慕淳	吉林大学中日联谊医院泌尿外科	63	410	11.0	18.0
3	王金辉	吉林大学中日联谊医院泌尿外科	3	18	1.0	3.0
4	李霄		18	65	5.0	7.0
5	齐延新		1	0	0.0	0.0
6	刘广臣	吉林大学第一临床医院创伤外科	2	0	0.0	0.0
7	孙丹丹		1	0	0.0	0.0