用于CMV启动子序列检测的绝对定量PCR方法的建立及验证

• 作者: 李波 汪巨峰 王三龙 苗玉发
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 关键词: 实时定量 PCR 优化 CMV启动子 质粒
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 46-48
• 页数: 3页
• 字数: 2754字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立和验证用于CMV启动子序列检测的绝对定量PCR方法.方法 针对CMV启动子序列设计探针和引物,用SYBR Green I熔解曲线分析引物扩增的特异性.对反应体系进行系统优化.用含CMV启动子的基因治疗产品和质粒标准品验证建立的PCR方法.结果 上游引物为5′-AGACTTGGAAATCCCCGTGAGT-3′,下游引物为5′-CGTATTAGTCATCGC-TATTACCATGGT-3′,探针为5′- AACCGCTATCCACGCCCATTGATG -3′.扩增的特异性较强,反应体系优化后能达到较高的灵敏度.Ct值的变异系数都小于2％.标准曲线的定量范围为1.5×102～ 1.5×107拷贝,灵敏度为30拷贝.质粒标准品和基因治疗产品的扩增效率相近.结论 建立了检测CMV启动子序列的绝对定量PCR方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苗玉发		21	15	2.0	2.0
2	李波		70	141	7.0	9.0
3	汪巨峰		23	28	3.0	4.0
4	王三龙		12	7	2.0	2.0