miR-181a对耳蜗毛细胞c-fos表达调控的研究

• 作者: 刘移民 王致 郭垚 陈利梅
• 来源期刊: 中华劳动卫生职业病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: c-fos miRNA 耳蜗毛细胞 靶基因
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 742-747
• 分类号: R736.1
• 字数: 5288字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9391.2012.10.006

摘要

目的 探讨在耳蜗毛细胞氧化损伤中表达异常的miR-181a对原癌基因c-fos的生物学调控作用.方法 采用叔丁基过氧化氢(t-BHP)染毒,设50、100、200μmol/L 3个浓度组和未染毒对照组对HEI-CO1细胞染毒12h,提取细胞总RNA及细胞总蛋白,采用荧光定量PCR(qPCR)检测miR-181a/-181d表达；选择表达异常的miR-181a为研究对象,检索生物信息学网站,对c-fos 3'端非翻译区域(3'-UTR)上miR-181a可能的作用靶序列进行预测分析；用脂质体转染入miR-181a的mimics,qPCR检测转染效率；qPCR观察c-fos mRNA水平表达量的改变；免疫印迹(Western blotting)法观察毛细胞中c-fos蛋白表达量的改变；构建野生型的融合c-fos-3' UTR的重组pGL3质粒(pGL3-c-fos-3' UTR-WT),利用双荧光素酶报告基因检测系统检测在高表达miR-181a后荧光素酶活力的改变情况.结果 qPCR结果显示,miR-181a在100、200 μmol/L染毒浓度组表达下调,低表达倍数分别为0.744和0.766,差异均有统计学意义(P＜0.01)；而miR-181d在50 μmol/L浓度组表达升高,高表达倍数为1.29,差异亦有统计学意义(P＜0.01),在100、200 μmol/L 2个染毒浓度组中的表达变化的差异无统计学意义(P＞0.05)；通过预测显示,在人类和小鼠中,c-fos均受miR-181a的调控,在种子区域完全互补,靶序列在物种之间也十分保守；脂质体转染入miR-181a mimics 24h后,qPCR结果显示,在miR-181a mimics转染组中miR-181a升高892.979倍；与对照组相比,在miR-181a mimics转染组的耳蜗毛细胞中c-fos mRNA的表达增高,差异有统计学意义(P＜0.05)；Western blotting观察结果显示,与对照组相比,c-fos蛋白在miR-181a mimics转染组中表达升高,差异有统计学意义(P＜0.01)；成功构建pGL3-c-fos-3' UTR-WT的重组质粒,双荧光素报告基因检测系统结果显示,在高表达miR-181a时,野生型pGL3-c-fos-3' UTR-WT报告载体的荧光素酶活力并未受到抑制,反而增强.结论 miR-181a对c-fos mRNA和蛋白的表达无直接抑制作用.c-fos可能不是miR-181a的靶基因,生物信息学预测结果可能是假阳性的.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王致		38	301	9.0	15.0
2	郭垚	中山大学公共卫生学院	2	3	1.0	1.0
3	陈利梅	中山大学公共卫生学院	3	2	1.0	1.0