miR-200a对奶山羊乳腺上皮细胞乳脂合成相关基因mRNA表达的影响

• 作者: 张犁苹 朱江江 林先滋 石恒波 罗军 苟德明
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: pri-miR-200a 重组腺病毒 乳腺上皮细胞 西农萨能羊
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 遗传繁殖
• 页码范围: 1028-1036
• 分类号: S827|S813.3
• 字数: 5566字
• 语种: 中文

摘要

旨在构建pAd-pri-miR-200a重组腺病毒,使其在奶山羊乳腺上皮细胞中稳定表达miR-200a,研究miR-200a对乳脂合成相关基因mRNA表达的影响.以西农萨能羊DNA为模板扩增pri-miR-200a.采用Ad-Easy系统构建重组腺病毒载体pAd-pri-miR-200a,并于HEK 293细胞株中进行病毒的包装、扩繁.TCI50法测定病毒滴度.qRT-PCR检测miR-200a及16个乳脂合成相关基因mRNA表达水平.序列分析结果显示,pri-miR-200a包括pre-miR-200a 86 bp和侧翼序列共297 bp.酶切结果证实pAd-pri-miR-200a构建成功.Ad-pri-miR-200a滴度达8×109 PFU· mL-1.实时定量结果表明,Ad-pri-miR-200a(MOI为200)感染奶山羊乳腺上皮细胞72 h,miR-200a的表达量较对照高出2.4倍.同时miR-200a的过表达引起10个基因mRNA表达量下调,6个基因mRNA表达量上调.其中脂肪酸从头合成相关基因FASN、脂滴生成相关基因TIP47及脂肪酸运输相关基因FABP4降幅较大,分别下降了0.47、0.89及0.65倍.而TAG生成相关基因DGAT1和脂解相关基因HSL较对照分别增加了0.52和1.49倍.本研究获得的重组腺病毒Ad-pri-miR-200a能在山羊乳腺上皮细胞中稳定表达miR-200a,同时miR-200a过表达影响乳脂合成相关基因mRNA表达水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苟德明	深圳大学生命科学学院	7	32	4.0	5.0
2	罗军	西北农林科技大学动物科技学院	91	625	13.0	20.0
3	张犁苹	西北农林科技大学动物科技学院	7	65	6.0	7.0
4	朱江江	西北农林科技大学动物科技学院	13	58	5.0	7.0
5	林先滋	西北农林科技大学动物科技学院	5	63	4.0	5.0
6	石恒波	西北农林科技大学动物科技学院	9	29	3.0	5.0