干扰CREB基因对奶山羊乳腺上皮细胞脂质合成相关基因表达及甘油三酯合成的影响

• 作者: 姚大为 宋文芹 李秋玲 杨春蕾 王添祯 陈成彬 马毅 马静
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 奶山羊 乳腺上皮细胞 CREB RNA干扰 脂质合成 甘油三酯
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 2413-2421
• 页数: 9页
• 分类号: S287|S813.3
• 字数: 5986字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2019.12.005

摘要

旨在筛选奶山羊 cAMP应答元件结合蛋白 CREB(cAMP response element binding protein)基因的 siRNA,揭示干扰该基因后对乳腺上皮细胞中乳脂合成相关基因表达及甘油三酯合成的影响.本研究通过 qRT-PCR方法从西农萨能奶山羊乳腺组织中扩增 CREB基因完整的 CDS区,进行序列分析和不同泌乳时期表达水平分析,合成靶向 CREB基因的 siRNA,利用荧光定量 PCR筛选有效 siRNA,并检测脂质合成相关基因的表达,采用试剂盒检测细胞内甘油三酯含量.结果表明:1)克隆得到全长为 984 bp的奶山羊 CREB基因的 CDS区(GenBank登录号:MK158073),并对其进行生物信息学分析.2)该基因在奶山羊泌乳盛期乳腺组织的表达量为干奶期的1.93倍(P＜0.05).3)成功筛选到靶向 CREB基因的有效 siRNA,干扰效率为 72％(P＜0.01);并将其在奶山羊乳腺上皮细胞进行转染,通过 qRT-PCR检测脂质合成相关基因的表达,与对照组相比,干扰 CREB基因后显著抑制了 FASN 、ACACA 、SCD1,FABP3,LPL 、CPT1B、GPAM和 DGAT2基因表达量(P＜0.05,并显著增加了 HSL基因表达量(P＜0.05);且细胞内甘油三酯含量被显著下调(P＜0.05).综上所述,CREB基因在奶山羊原代乳腺上皮细胞中很可能通过调控脂质代谢相关基因的表达及甘油三酯含量对山羊的乳脂合成过程发挥重要作用.