苯酚羟化酶基因工程菌表达优化及特性研究

• 作者: 孔春雷 时胜男 曲缓媛 曹湘禹 李新亮 沈娥 马桥 黄益养
• 来源期刊: 环境科学学报
• 学科: 地球科学
• 关键词: 苯酚 苯酚羟化酶 表面响应法 底物多样性
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1549-1556
• 分类号: X172
• 语种: 中文

摘要

利用表面响应法优化苯酚羟化酶基因工程菌（PH_IND）的生长条件（种龄、接种量）及表达条件（诱导OD600、IPTG浓度、诱导时间、诱导温度）,并对其粗酶特性进行考察.实验结果表明,菌株PH_IND的最佳生长条件及表达条件为：种龄7.19h,接种量1.39%,诱导OD6000.54,IPTG浓度0.19mmol·L-1,诱导时间2.37h,诱导温度35℃,此时,苯酚羟化酶最大酶活力为0.6167U·mg-1.粗酶特性分析表明,苯酚羟化酶的最适pH和温度分别为8.0和40℃.Ba2＋、Fe3＋、Hg2＋、Pb2＋对苯酚羟化酶有明显促进作用,而Ca2＋、Co2＋、Cu2＋、Mg2＋、Mn2＋对苯酚羟化酶有抑制作用.底物广谱性实验表明,苯酚羟化酶具有极强的芳香化合物降解能力.