禽戊型肝炎病毒中国分离株ORF3蛋白的真核表达与抗原性分析

• 作者: 周恩民 肖一红 胡守彬 赵菲菲 赵钦
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 禽戊型肝炎病毒中国分离株 ORF3蛋白 真核表达 抗原性
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 2288-2294
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.11.019

摘要

[目的]为获得禽戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)中国分离株(CaHEV) ORF3基因重组蛋白,并对其抗原性进行分析.[方法]提取CaHEV总RNA,通过RT-PCR获得ORF3基因,构建重组质粒pFastBac-HTB-ORF3,转座DH10Bac感受态细胞,提取重组杆粒Bacmid-ORF3,转染sf9细胞,用SDS-PAGE、IFA和Western blot对重组蛋白表达进行鉴定.优化表达条件,将纯化的ORF3蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用制备的多抗分别与截短表达的3段CaHEV ORF3蛋白进行Western blot和ELISA检测,分析ORF3蛋白的抗原表位区.[结果]SDS-PAGE、Western blot和IFA结果表明CaHEV ORF3蛋白被成功表达且存在细胞内,昆虫细胞在接毒后4天表达量最高.将ORF3重组蛋白免疫小鼠,利用间接ELISA方法,对制备的多抗倍比稀释检测,效价达到104,Western blot和ELISA分析表明ORF3蛋白C端74-88氨基酸处具有较强的抗原性.[结论]本试验用Bac-to-bac系统成功构建含有CaHEV ORF3基因的重组杆状病毒,并在昆虫细胞中得到表达,其主要抗原表位位于C端74-88氨基酸,为进一步研究禽HEV ORF3的蛋白结构和功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	肖一红	山东农业大学动物科技学院预防兽医系免疫生物学实验室	50	255	6.0	15.0
2	胡守彬	山东农业大学动物科技学院预防兽医系免疫生物学实验室	2	0	0.0	0.0
3	赵菲菲	山东农业大学动物科技学院预防兽医系免疫生物学实验室	2	0	0.0	0.0