结构特异性核酸酶FEN1对HBV复制的影响

• 作者: 单雪峰 徐蕾 方岩 潘万龙 胡接力 许舸 陈可 黄爱龙
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: DNA瓣核酸内切酶类 慢病毒载体 乙型肝炎病毒 病毒复制
• 年，卷（期）: 2012,（19）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1925-1928
• 分类号: R373.21|R394-33|R394.3
• 语种: 中文

摘要

目的 探索宿主因子FEN1对HBV复制过程的影响.方法 构建FEN1过表达慢病毒质粒,酶切鉴定并测序,转染293FT细胞,Western blot检测FEN1蛋白表达.将该质粒转染HBV复制稳定细胞系,设立慢病毒包装改造质粒pLenti6/V5-D-TOPO和不转染质粒的细胞作为对照.ELISA检测细胞上清,Southern blot及Real-time PCR检测HBV DNA.结果 初筛阳性克隆提取质粒酶切鉴定,于FEN1及线性载体质粒大小处出现明亮单一条带,测序结果表明序列插入正确,Western blot检测FEN1蛋白表达量为对照的2～3倍.FEN1过表达质粒转染HBV复制稳定细胞株,细胞上清ELISA检测HBsAg抗原呈阳性,D(450)值为(1.982±0.032)；细胞内提取病毒DNA行Real-time PCR,绝对定量拷贝数为1.18×109,Southern blot检测亦表明HBV复制水平明显上调.结论 结构特异性核酸酶FEN1能够明显促进HBV DNA复制,是体内一种重要的病毒复制调控因子.