副猪嗜血杆菌OMP P2基因的克隆与表达

• 作者: 姜平 宋艳华 张国龙 曹珺 李军星 李玉峰 李鹏 王先炜
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 副猪嗜血杆菌 OMP P2基因 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 212-215
• 分类号: S852.6|Q786
• 语种: 中文

摘要

利用已分离的菌株HB070412,根据NCBI上GenBank中的HPS序列（ZP_02477753）设计了1对引物,用PCR方法扩增了副猪嗜血杆菌外膜蛋白中的穿孔素前体蛋白P2基因（OMP P2）,并克隆到载体pMD18-T（T-Vec-tor）,序列测定结果表明OMP P2基因全长1 077bp,序列同源性分析表明该基因相当保守,与所报道的HPS OMPP2基因之间的核苷酸序列同源性为98.1%,氨基酸序列同源性为95.5%。用pGEX-6p-1构建了原核表达载体pGEX-P2,在大肠杆菌中进行了高效表达,表达蛋白约占菌体总蛋白的50%,主要为包涵体形式。SDS-PAGE电泳结果显示表达的融合蛋白约为65 000,Western blot结果表明该表达蛋白具有抗原性。