人CD3ξRNAi逆转录病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 张蓓 王冰 王娟 解西河 高美华
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: shRNA CD3ξ CD59 PA317 逆转录病毒载体
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 40-42,45
• 分类号: R392.11
• 语种: 中文

摘要

目的:利用RNAi表达载体法构建并筛选携带针对CD3ξ基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体及稳定产毒的细胞克隆.方法:利用.DNA重组技术,设计3条60bp能转录产生靶向CD3ξ小发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,以pSUPER.retro.neo+ gfp质粒作为空载体经限制性核酸内切酶酶切后与RNAi序列进行重组,构建CD3ξ-pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体,脂质体法转染包装细胞系PA317,建立产生逆转录病毒的细胞克隆.结果:重组载体经限制性核酸内切酶酶切、PCR和测序鉴定表明CD3ξ-pSUPER retroRNAi 重组质粒构建成功；脂质体法将重组载体转染包装细胞系PA317,表达绿色荧光蛋白,表明包装成功.结论:成功地构建了特异性沉默CD3ξ基因的pSUPER retroRNAi逆转录病毒载体及稳定产毒的细胞系,为后续研究CD59与CD3ξ在T细胞内信号转导的相互作用提供理论和实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高美华	青岛大学医学院免疫学教研室	181	728	12.0	19.0
2	王娟	青岛大学医学院免疫学教研室	37	240	8.0	14.0
3	张蓓	青岛大学医学院免疫学教研室	62	211	9.0	11.0
4	王冰	青岛大学医学院免疫学教研室	27	66	5.0	6.0
5	解西河	青岛市中心医院生物治疗中心	1	3	1.0	1.0