水中肠道食源性病毒的多重RT-PCR检测法

• 作者: 何丽 李君文 王新为 谌志强 邱志刚 郭旋 金敏 陈照立
• 来源期刊: 环境与健康杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 多重RT-PCR 肠道食源性病毒 诺如病毒 轮状病毒 腺病毒
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 基础与应用
• 页码范围: 876-880
• 分类号: R117
• 语种: 中文

摘要

目的 建立能同时检测水环境中肠道病毒(Enterovirus,EVs)、诺如病毒GⅡ(Norovorus,Nov GⅡ)、轮状病毒(Rotavirus,RVs)、腺病毒(Adenovirus,AdVs)的多重RT-PCR检测.方法 根据GenBank收录的肠道食源性病毒核酸序列,利用软件DNAMAN设计肠道病毒通用引物以及Nov GⅡ、RVs、AdVs的特异性引物；将这4对引物置于同一体系中进行多重RT-PCR,利用各种肠道食源性病毒的核酸模板检测其特异性并通过不同滴度[100～107 pfu(copies )/ml]病毒测试其灵敏度；利用加标实验验证该方法的准确性；通过对5份河水或某水厂出水大体积水样(50L)进行病毒富集与检测,以确定该方法的实用性,同时,采用传统细胞培养法验证其结果.结果 该方法对目的病毒均获得了理想的电泳条带,而对其他病毒无非特异扩增；对EVs、AdVs的最低检出滴度均为10 pfu/ml,Nov GⅡ-4为10 copies/ml,对RVs的最低检出滴度为102 pfu/ml;加标实验检测结果准确率为100％;对5份河水或某水厂出水大体积水样进行病毒富集与检测,对以上各种病毒均有检出且与细胞培养结果一致.结论 该方法不仅特异性强、灵敏度高、简便快捷,而且准确率高,实际应用性强,适用于水中肠道食源性病毒的快速检测.